Samberg, 18 Ağustos 1978'de Berkeley, California'da doğdu. Berkeley'deki Willard Junior Lisesi'ne gitti ve burada en iyi iki arkadaşı Jorma Taccone ve Akiva Schaffer ile tanıştı. Arkadaşlarını ve sınıf arkadaşlarını eğlendirmek için birlikte alışılmışın dışında komedi skeçleri yazdılar ve oynadılar.
